実験のこだわりをかたるスレ

TA TOPOやるくらいなら
Blunt TOPOつかう

リン酸化って必要なのですか・・・・
私はブルースクリプトのSmaIサイトに、Pfuでつくった
フラグメントをそのままライゲーションしてるけど・・。

>64
SmaIカットしたベクターをCIP処理していなければ大丈夫です。
もししていたら、リン酸基がベクターとインサート両方にないことになるので、
理論上はligateされません。
PCR primerが5'phosphate処理したものを使っていれば大丈夫ですが. . .。

ってかベクターBAPかけてても普通にはいるし

>66
すいませんが教えてくださいです。
BAPかけたブラントのベクターとリン酸化してないPCR産物
どうやったら普通にはいりますか？
ベクターとインサートの量比とか
特別なライゲーションのテクニックがあったら教えてくださいです。

>66
BAPのかかり方がいまいちなんだよ。だから入る。

http://fry.to/kokoro

ということは
ちょうどいいぐらいに中途半端なBAPのかけ方があるんでつか？

ごめんなさい。酔っぱらってかいたネタです

＞６７
PCR断片の末端をきれいにしてやればいいでしょう（Polishing）。
PCRの反応液50ul当たり
0.5ulの10mM dNTPと１ulの1mM ATP、
0.5ulのT4 DNApol(NEB)と0.5ulのT4 polynucleotide kinase(NEB)を加えて、
室温で１５分→DNA精製→ligation
これで失敗したこと無い。
あ。ベクターはEcoRVで切ったpBluescriptIIを良く使います。

それはひょっとして
PCR反応液のバッファがそのまま
T4Polとキナーゼのバッファにもなってるってことすか？
そういう場合，あらためてdNTPを入れるのは念のため？

T4DNApolについては
http://www.neb.com/neb/products/polymerases/203.html
T4 DNA Polymerase is active in any 1X NEB restriction enzyme reaction
buffer and T4 DNA Ligase reaction buffer when supplemented with dNTPs.
T4PNKについては
http://www.neb.com/neb/products/mod_enzymes/201.html
This buffer is suitable for forward reactions, but for the purpose of
radiolabeling does not contain ATP. For nonradioactive phosphorylation,
supplement to a final ATP concentration of 1 mM or use T4 DNA Ligase
Reaction Buffer (see notes).

T4 DNA Ligase(NEB)を買うとBufferがめちゃくちゃたくさんついてくる。
しかもATP添加済み。これ最強。
しかしDTT濃度がやたら高かったような気がする。上記の用途に問題ないのか？
そんなことも覚束ない俺はタカラのブラントカイネーションキットでも買って
なさいってこった。

シークエンスリアクションは薄め液を使う。

ふつうのPCR Bufferで薄める。

（＾＾）

（＾＾）

>>76
それじゃいつものPCR用のバッファが足りなくなるじゃん
ｐＨも低いしな

sigmaの薄め液で薄める

鬼の居ぬ間に実験。

（＾＾）

>37
KOD Plus使ったのにmutation入りました。
俺の腕がmutagenなのか。

>83
はいるよ、そりゃ。

（＾＾）

　　 ∧＿∧
　　（　　＾＾ ）＜ ぬるぽ（＾＾）

組織からの細胞分離は「２回洗え」と言われたら５回洗う｡

人から聞いたプロトコールは、真に受けない。

寒天は自分で畑で育てたものしか
使わない。

　 ∧＿∧　　　　http://togoshi.ginza.st/hiroyuki/
　（　・∀・）/＜　こんなの有ったっち♪
http://togoshi.ginza.st/hiroyuki/2ch01.html
http://www.togoshi.ginza.st/hiroyuki/2ch09.html
http://togoshi.ginza.st/hiroyuki/2ch05.html
http://www.togoshi.ginza.st/hiroyuki/2chz08.html
http://togoshi.ginza.st/hiroyuki/2ch06.html
http://www.togoshi.ginza.st/hiroyuki/2ch10.html
http://togoshi.ginza.st/hiroyuki/2ch04.html
http://www.togoshi.ginza.st/hiroyuki/2ch03.html
http://togoshi.ginza.st/hiroyuki/2ch02.html
http://www.togoshi.ginza.st/hiroyuki/2ch07.html

をい、寒天の原料は紅藻テングサだぞ

>>89　はどの部分がネタでどの部分がマジなのかが気になるｗ

ゲルライトとか、ゲランガムって原料はなんですか？

━―━―━―━―━―━―━―━―━[JR山崎駅（＾＾）]━―━―━―━―━―━―━―━―━―

━―━―━―━―━―━―━―━―━[JR山崎駅（＾＾）]━―━―━―━―━―━―━―━―━―

　＜アスペルガー症候群（自閉症スペクトラム）←脳の機能的疾患（遺伝が要因）＞
http://www.ypdc.net/asuperugar.htm
http://www.autism.jp/l-02-03-aspe3.htm
http://www.geocities.co.jp/Beautycare/5917/as/
●接し方のルールがわからず無邪気に周囲の人に対して迷惑なことをしてしまうこと
がある。人を傷つけるということには鈍感です。年配の先生に向かって「おばあさん
先生おはようございます」と明るい大声で挨拶する生徒もいる。こういった言動をす
る場合にも彼らには悪意はない。
●小さな声でひとり言を言ったり、考えていることを声に出して言うことがある。
●融通が利かないことも学校生活で問題になる。時間割の変更や突然の教師の欠勤と
いう事態で不安を感じたりかんしゃくをおこしたりする。あまりに規則に厳格なため
に、遅刻した同級生に延々と注意をしたり、修学旅行などで消灯時間をかたくなに守
り、他の生徒のヒンシュクをかったりすることがある。
●行動･興味･活動のパターンが貧困で反復常同的なことも自閉症の特徴である。すな
わち、日常の活動の様々な面にわたって柔軟性のないルーティン（決まった手順や日課）
を押しつける傾向、これを慣れ親しんでいる習慣や遊びのパターンだけでなく、たいてい
は新しい活動にも押しつける。そしてルーティンや個人的な環境の細部の変化（家の中の
置物や家具の移動によるなど）に対する抵抗がみられることがある。
●揺れる木の葉を見続ける子どもは興味のレパートリーが狭いとも言え、視覚的な敏感さ
があるといっても良い。
●精神遅滞を伴うものと伴わないもので大きく分かれる。１００％果汁のオレンジジュー
スを思い浮かべてください。それにだんだん水を加えて薄めて行くと終いには水にごく近
くなる。一口飲んで「オレンジジュースだ！」とわかるものは自閉症、水に近いけれどな
にかオレンジの味が混じっているのがアスペや高機能・・。その濃度はさまざま。濃いオ
レンジジュースであったとしても早期の療育や周りの対応によって水に近づいていくこと
は可能。しかし間違えてはいけないのはオレンジジュースが一滴でも落ちている場合は
「純粋な水」にはなれないのです。

　　　 　∧＿∧
ﾋﾟｭ.ｰ　(　　＾＾ ） ＜これからも僕を応援して下さいね（＾＾）。
　　＝〔~∪￣￣〕
　　＝ ◎――◎ 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　山崎渉

ryou-slay

大は小を兼ねる！

100　ゲット！

　__∧＿∧_
　|（　　＾＾ ）|　＜寝るぽ（＾＾）
　|＼⌒⌒⌒＼
　＼ |⌒⌒⌒~|　　　　　　　　　山崎渉
　　 ~￣￣￣￣

　__∧＿∧_
　|（　　＾＾ ）|　＜寝るぽ（＾＾）
　|＼⌒⌒⌒＼
　＼ |⌒⌒⌒~|　　　　　　　　　山崎渉
　　 ~￣￣￣￣

扱ってる菌のことを「うちの子」と呼ぶ。

　　　 (⌒V⌒)
　　　│ ＾ ＾ │＜これからも僕を応援して下さいね（＾＾）。
　　⊂|　　　　|つ
　　　（＿）（＿）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　山崎パン

RI実験で手袋をしない

ageとくか

>103
同様に、培養させている細胞のことを「ｳﾁの○○」と呼ぶ。

RNA実験で手袋をしない

もちろんアクリル板のプロテクタなんて不要
手も洗わない

ＲＮＡ実験では必要ない罠ｗ

ﾏｼﾞで？？！！

手は洗えよ