組織培養スレ

組織培養について語るスレ

【育種】趣味の交配・組織培養【バイテク】
http://www.logsoku.com/r/engei/1115104757/

>>1
乙です

前スレ落ちても皆無反応だったから興味ないのかと思ってたわ
地味に嬉しい

いつの間にか復活してるじゃん､やったね
組織培養初めて見たいからずっと続いて欲しい
クローンで大量生産とか素敵やん

カルスの増殖を、マグネチックスターラーで液体培地に空気混ぜ込みながら
やろうと思うんですけど問題ないですかね？

振とう培養と似たようなものなのでガス交換の量は大丈夫だと思いますが、
回転子がカルスに当たるのがストレスにならないかちょっと心配してます。

経験のある方ご意見ください。
(無理と言われてもとりあえずやってみると思いますが…)

ストレスというか粉々になりそう

100rpmでも回しすぎのような気がするな

後出しみたいだけど、
ステッピングモーター使って低速タイプのスターラーを自作するつもりだから、
数十rpmくらいなら出来ると思う。モーターケチってるから本物に比べると非力だけどそこまで粘性有るものかき混ぜるわけでもないし。
材料費計算したら２万円弱で15基の回転機構を持つユニットが作れるんじゃないんかなーと皮算用してる。

CPUファンに磁石貼り付けるのは？
低電圧なら回転数低くなるよ

http://engei2ch.s252.xrea.com/cgi-bin/0/photo/plant4754.jpg
回転子をフラスコの底に接着して、さらに二重容器にすることで間接的に回転力を伝えられないだろうか？
フラスコの姿勢を安定させるのが難しいかも

>>8
一応そっちの方法も考えたけど低速で回るかちょっと不安…どっちがいいかね？
そっちの構成だと15基で8千円コース。

>>10
多分フラスコがコケる。そこまでするならフラスコを台に置いて、
台ごと揺らす機構つくったほうがいいんじゃないかな

間違えた>>8じゃなくて>>9だった
あと15基ってのはこっちのラックの置き場の問題だったわ
CPUファンなら25基/1万円くらいで作れるはず

無加工でなければ素直に回転テーブルの方が良さそう
無菌室､植物ホルモンの入手､カルスの増殖
ほんと組織培養は地獄やで
大量生産する覚悟がないと手を出しにくい

>>12
CPUファンでスターラーはたしかア理科のクラレが自作してた。聞いてみたら？
https://twitter.com/reraku

>>1
乙

ネタはないがスレはいつも読んでる。
機材もそろえたけど、3.11で中断してそのまんま。

スレが復活したので喜んで覗きに来たら
すでについていけない内容に…

基本的なことで申し訳ありませんが教えてください
寒天培地の中に入れる｢ショ糖｣はなぜ入れるのでしょうか
カビや最近の餌になるだけで植物の生長には不要だと思うのですが
(実際水耕栽培では砂糖水なんて使わないし)
どこを見ても入れる理由が書いてありません

>>17
エネルギー源（容器内ではほとんど光合成できない）、浸透圧調整、不定芽・不定根の形成促進

うちの本にはこう書いてあった。

糖は光合成のかわり

少なくとも根っこから糖分は吸収出来ないよね
カルス限定なのかな(細胞が露出してるみたいなものだから)

無菌培養の環境なら植物体でも吸収するらしいぞ？理屈は知らんが。
ttp://www.jspp.org/cgi-bin/17hiroba/question_search.cgi?stage=temp_search_ques_detail&an_id=1792&category=mokuji

しかし、表面を殺菌した種子を、殺菌した培養液で栽培する無菌植物では、ご指摘のように、培養液に与えた糖分が光合成の代わりをして、植物を生育させることができ、実験室ではわりと普通に行われています。これは糖を横取りする微生物がいないので可能になる


おお知らなかった｡植物も直接糖を吸収出来るんですね(ただし無菌状態に限る)
それで試験管でも育つのか･･･勉強になりました｡
やはり無菌室をどうにかしなければ

葉でも根でも糖は吸収できる

>>22
部屋丸ごと無菌にするなんて豪勢なことする必要ないからな？
クリーンベンチとか無菌箱で無菌操作するところだけ確保すれば良いんだから…
分かってるかも知れないけど念のため

分かってる｡いろいろ見てるが作れる気がしねえw

衣装ケースを横にして奥側にアルコールランプ設置しただけのでやってるが、
コンタミ発生などほとんどないよ。

衣装ケースにエタノール吹いてからアルコールランプ使うと燃え上がりそうで怖いんだが

関連スレで出てたPPMって薬剤の名前だったのか紛らわしい！
植物組織にダメージ与えないので、培地に混ぜ込んでコンタミ防止できるらしいけど…

メーカーの説明読む限りだとクエン酸回路と電子伝達系に作用するらしいから
作用がうっすい殺菌剤ってだけみたいに見える。
シダ、コケ、藻類、水草NGって言ってるしコレ本当に植物に悪影響無いの？

使い物になるなら、とっておきの個体用に買ってみたいんだが

前スレだとアルコールの代わりに逆性石けん？がいいとか

PPMは外から植物を用いるのに効果的だと思う
過信は禁物。初心者が使うと技術が身につかない、らしいね

塩化ベンベルコニウム or オスバン(商品名)だね
殺菌能力は高い｡近所の薬局で手に入るならエタノールよりいいかも

×　塩化ベンベルコニウム
○　塩化ベンゼルコニウム
薬局によっては1本400円ぐらいで売っている事もある

前スレの名前のまま、再立てして欲しかったな・・・。

交雑スレみたいなのがあるけど、なんかあっちじゃ前スレみたいな
話が出来ないんだよね・・・。

>>31
逆性石けんなら塩化ベンザルコニウムじゃなくて?
日本薬局方の売場を探せば、薬局ならどこでも置いてあると思うよ

殺菌は無水エタノール流用じゃダメ？
家族の事情により皮膚殺菌の為消毒用エタノール（７０％）の方も常備してるけど
自分用自作肌ローション添加剤目的と、自作ヨーグルトの容器殺菌に無水エタノール（９９．５％）を使ってる。
ちなみに無水エタノール、保存中に密閉が甘いと気が付いたら量がかなり減ってるので充分注意。

オスバンは昔仕事で使用してたけど、成分が微量どうしても残っちゃう
素人使いだと濃度によっては皮膚に誤って付けば炎症起こす人もいるので注意。

アレルギー体質でアトピーの自分は手袋すら使いたくなく、薬剤なるべく扱いたくないし
当時の仕事から遠ざかってかなり年月かかってるけど、心配。
（当時ヒビテン使用の頻度が多い時だけ痒くなってた）

ヨーグルトは菌類などだから、オスバンって容器殺菌には使えないかもね・・・。
他の消毒剤の話だけど容器殺菌したら、殺菌成分が残りヨーグルト（ケフィアの方）
の菌や酵母が殖えづらかったらしく失敗した事ある・・・。時間かけても固まらなかった・・・。

オスバンだけじゃ無かったのだろうけど仕事前に就く前の専門で学んでいた時に頻繁な消毒剤使用で
皮膚が荒れすぎ手の薄い皮一枚の状態が全く治らず好きな仕事をやむなく諦めた人を見てるので
経験上使用については過敏になってるのもある・・・。

無水エタノールは乾けば全く残らないし、肌に着いても乾燥するだけで後にケアすれば問題なし。
なによりも、改めてオスバンも買っちゃうと家計に響くしｗ市販品一瓶買うと、使いきれないんだもの。

個人的には、道具の殺菌に病院などでも使ってる小型高圧滅菌機が欲しいなー。
滅菌パックも個人で入手可能なら、滅菌後ある程度の期間の保存も出来るし

あ・・・。
わかりづらい書き込みになってる・・・。

誤）ヨーグルトは菌類などだから、

正）もし、ヨーグルトなど有用菌類関係での利用では、

という事です・・・。

無水エタノールより70%エタノールの方が殺菌力強いですよ。

とつぜん何を言い出すんだこの人

>>36
後学のために詳しく

>>36は事実

100％だとすぐ蒸発してしまうけど、70％なら蒸発するのに時間がかかるぶんだけ
効果が高い。

培養を扱う論文だと、70〜80％で使用しているものがほとんど。

そんなことは常識｡問題はなぜ>>36が突然言い出したかだ

とりあえず>>40は>>34をよく読め

イソプロピルアルコールじゃダメなのかな？
エタノール70％でも高いじゃん

パッタリ書き込み無くなったな…
組織培養やってる人が少ないのか
秘密にしたいから書き込まないのかどっちなんだろうな？

割とその辺気になるわー

上で盛り上がってたアルコールの話だけど、器具や手指の消毒に使うやつでしょ？
そこまで盛り上がるほどのことかね。
まさか培養物や培地に直接吹きかけるって話じゃないよね。

元々過疎だから･･･
もう少し入門的な何かが欲しいね
無菌箱とか考えずに試しに寒天培地作ったらきれいなカビ玉が育成できましたやったね!

花粉管観察用に寒天培地を冷蔵庫で半年以上保管してたらコンニャクに形質転換してたｗ
速攻でエタノールシュッシュのピューラックス原液ドブ掛けしたわ

関連（？）スレ　
きのこ栽培
http://uni.2ch.net/test/read.cgi/kinoko/1311490078/

結局無菌操作なんだよ面倒くさいのは。

誰かお手軽に作れる無菌箱の方法を確立してくれ
プラスチックの衣装ケースとか良いけど､どうやって手を入れるんだってばよ

「無菌箱 自作」で作例は見つかる。

風呂でいいじゃん
全身無菌箱に入るようなもんだし

水場ってむしろ雑菌多くね？

要は微生物が飛び込まなきゃいいのよ
霧を充満させて、それが落ちるの待てば浮遊菌も一掃出来るでしょ

人間が動くだけでホコリが舞うんだが。

循環式紫外線空気清浄機を自作する

>>54
全裸にマスクとシャワーキャップ
レインコートでもいいけど、シャワー浴びたら問題ないよ

無菌箱の中を全部両面テープで覆ったら･･･(適当

>>56
そういや無菌操作の前にシャワー浴びて身を清める儀式が習慣になってるわ
無菌操作は宗教だったのか…

シャワーを浴びたりはしないけど、培地をいじる時は全裸でやってます。

そして毛がコンタミ

あるある

植物でもSTAP細胞と同じ方法で脱分化させたら変異起こりにくくなったりするんだろうか？

？

ホルモン抜きでって意味じゃない？

クエン酸単独炭素源として培地つくったらコンタミ減るかな？

クエン酸て菌も利用するんじゃない？濃度が高かったら
繁殖しないだろうけど、植物の酢漬けみたいになるんじゃ…

細胞分裂の速度が早いほど効く抗癌剤みたいな菌抑制剤があればいいんだが

抗生物質使うという手もあるらしいが

昭和の昔の古いガーデンライフに
家庭で行うメリクロンについての手引きが載ってて
食用の酢に1分浸ける→蒸留水で洗う　を2〜3度くり返して
成長点を滅菌する方法が書いてあったな

最近、無菌・殺菌の話ばかりだね・・・。
時には実際実施しての成功例・失敗例も聞きたいな・・・。
どんな植物を無菌培養したいとか、実際やってみたとか・・・。

酢の殺菌効果はどれくらいなのか疑問だけど面白そう

>>70　失敗例があまりに初歩的すぎて書くのが恥ずかしいレベル
培地が固まらない、植継ぎで全滅、瓶の取り違え、等々

無菌･殺菌がクリアできたら9割は終わってるだろ常識的に考えて

親戚の爺ちゃんは、昔シンピジュームのメリクロンの仕事してたそうだが
ハイポネックスと潰したバナナで寒天培地を作ってたそうだ

培地にバナナの皮入れたらポストハーベストが効いてカビ生えなさそう

自然界の抗菌成分と言えばプロポリス。主に動物対象に付く菌に効くものだけど
これって植物に付く菌には効かないのかな？成分はミツバチが精製するけど元々は植物由来。

抗生物質のアレルギー持ちなので、代わりに抜歯や傷口を縫うほどの酷い怪我をすると必ず飲んでるが
化のう止めとして飲んでいて、自分は一度も傷周囲が腫れた事無し。持病の為に自己免疫が弱い体質なのに傷の治りも早くて良いし
風邪っぽい時も２日続けて飲んでおくと大抵悪化せずに治る。

医者には抗生物質の代わりに飲んでると必ず申告して、今まで一度も効果を否定された事も無い。

混じりッ気なしのプロポリスが入手出来れば、エキスを培地の殺菌に使えないかな。嫌気性の腐敗菌とかにも使えると良いんだけど
ただ、ミツバチが一時急激に減ってからエキス１００％のとか良質なものの入手は難しくなった・・・。

自分が入手し易くて愛飲してるのはブラジル産赤プロポリスエキスが使われてる製品で
普通のミツバチのプロポリスより成分含有が多く、より効き目が良いそうなのだけど
（以前は国産物使ってて実際違うと感じてる）なんせ余分に混ぜてあるものも多くてね、サメ肝油エキスとか・・・。

もし使えるのなら、普通のミツバチプロポリスなら周辺に養蜂業が多いので問い合わせれば少しは原料が入手できるかも。
ただ、何の植物から成分を得てるのかとか解らないし、抽出が面倒くさそうだけどね。

プロポリスは熱に弱いそうだからオートクレーブできないんじゃね？
別の滅菌方法試さないと使えなさそう。

ミリポアの出番か。高くつくな

はかりとかって、どんなん使ってますか？
今まで天秤をつかっていたんだけど、0.01gだいだとかなり厳しい。
安くていいのないかな。

教科書どおりに10倍量はかって薄めるじゃ駄目？

>>78
自分は使用目的が違うけど、ほんの少しの粉末を計る時は計りだと正確に計れないので
（計りの単位が細かくないのと、鼻息やくしゃみで飛ばしたりが怖いｗ）
「極厚計量スプーン」というのを使ってる
自分の持ってるのは最大が１スプーンで、最小単位は1/10スプーンの４本組。

ネット通販で売ってるのは、一組にもっと本数が多くて0.1cc位まで計れるのがあるみたいだけど。
これじゃダメ？

プロポリスで加熱がダメなのは酵素が壊れるからじゃなかったっけ？
殺菌に酵素も関係してたっけか。関係ないなら加熱して問題なさそうだけど

プロポリスの殺菌は人体内の乳酸菌などの有用菌には作用せず、悪玉だけを殺菌するとか
外部でも似た様な作用するかな・・・。

これって高いのかな？
http://www.cosmobio.co.jp/product/detail/02860001.asp?entry_id=3072

よくみたら販売終了ってなってたたわ
高いも安いもないな

てか培養に通常使われる防腐剤でいいじゃん

防腐剤ってどんなのよ？

植物ホルモンどこで買ってる？

農協

実用レベル(?)の純度なら農薬の名前でググって安いとこで通販
試薬レベルのは知らん。手続きとか大変そう。あと凄い高そう。

ベンジルアデニン(BA)とかオキシベロンとかは日本農業システムで買った
BAはビーエー液剤だっかたか
試薬なら和光純薬が適当な団体名で申し込めば売ってくれるとか前スレに書いてあったぞ

BAとNAAの試薬はggったら普通に買えそうな所が出てくるね。
一般試薬っぽいから、変な不純物が入ってる可能性はあるが。

それより植物ホルモンの使用と農薬取締法の関係がどうなっているかよくわからない。

急に書き込み無くなるよね。
深夜に圧力鍋で滅菌中。これが終わったら寝るんだ…

安物の圧力鍋だと目一杯中身あると
蒸気が横から漏れたりしてやり直しになるね

>>92
高級品だと、限度目盛ついてるけど
（ティファールの圧力鍋はその部分が外に出っ張ってる）
大体鍋の半分位だよ、限度量
理由は、圧縮する為に
ある程度の空気の量が必要なのかと。

ピーターソンバナナ培地

有機物入れたほうがいいのは分かるけど
結果がバラけそう、ウイルスが心配でやってない
それほど厳密にやってるのかと言われれば
返す言葉に詰まるのがオチだが

オートクレーブとか圧力鍋で不活化しないウイルスっているの？

やっぱり滅菌時に問題なくなりますか
家庭培養とはいえスーパーで売られる野菜果物を
避けてきたけど単なる思い込みだった

ドリームジャンボがあたったらクリーンベンチ買いたいな〜
誰も分かってくれないけど

自作か中古じゃダメなん？
家庭でやるだけなら自作が鉄板だと思うよ

普段クリーンベンチ邪魔なんだよな
みんな何つかってる？

日サロ

衣装ケースを横置きして、奥にアルコールランプ。
十分使えるし、コンタミなんて滅多にない。

衣装ケースの欠点は材質のPPが燃えやすい
あとは透明度ぐらいかな

カインズの斜め空きする衣装ケース
開閉部分の下に穴2つ空けて短いエンビ菅をホットゲルで接着し
長いゴム手を口を外側に折り返すように装着してる
殺菌は器材を中に入れた後、霧吹きで満遍なく散布
覗く部分を内側から吹いて準備完了

あれカインズで見るたびにクリーンボックスに改造したいと思っていた
やっぱりやっている人がいたかw

衣装ケースは折りたためない

部屋を閉め切ってマスクをする
ガスバーナー、あるいはアルコールランプを３台用いて上昇気流を作る
上昇気流の下で作業を行う
クリーンベンチはHEPAフィルターを通過してしまう微粒子が手元に降ってくると考えて良い

ヘパ通り抜けられる菌はなかなか無いんじゃないでしょうか

培養のスレがあるとは！

染色体倍加を狙って、オリザリン溶液を使いたいんだが
どうとかしたらいいかわかる人いますか？
DMSOとエタノールで溶かしたものを水で希釈するとすぐ析出してしまって使えないんだ・・・

コルヒチンはそのまま水溶液で使えたんだが、枯死率が高いのでオリザリンで試してみたいので
わかる人いたらぜひ教えてください！

素人の考えだけど、少量の溶剤と水で交互に溶かしていくって出なくなったら
水のみ入れてくのはダメなの？

>>109
オリザリンおよびコルヒチン処理によるスノキ属植物における倍数体の作出
https://www.jstage.jst.go.jp/article/hrj/11/2/11_205/_pdf
＞オリザリン溶液はDimethyl sulfoxide（最終濃度2％）で溶解した．

tetraploid induction by colchicine or olizalin in Rosa multiflora and bracteata.
http://www1.gifu-u.ac.jp/~fukui/introduction/20030403takahashi.pdf
＞DMSO 10%を含むコルヒチン(0.1mM〜10mM)及びオリザリン(0.001mM〜0.1mM)溶液に6, 12, 24 時間浸漬した．

こう書いてあるから適当なDMSO水溶液で希釈すればいいんじゃないかな
エタノールは不要

ハイポネックス培地って普通に圧力鍋で滅菌して大丈夫？
PH調整剤って焼いたベーキングパウダーでおk？
試薬棚とクリーンベンチが欲しいぜぃ…

ハイポ培地て名前があるとおりいけますよ
家庭用なら酢か重曹使ってる場合もあるようですが
自分はクエン酸のみでやってます。果物入れないので

>>113
アガーで固められるなら加熱も大丈夫ですよね
ベーキングパウダーには助剤として酸が入ってて、
重曹とは違うという事すらも知りませんでした
回答ありがとうございました

ちょっと気になったんですがクエン酸って消費されてpH動いちゃいませんか?
すぐ植え替える前提なのでしょうか

414 ：花咲か名無しさん：2014/07/07(月) 10:17:51.47 ID:xBezLemX
交配したいヤツ・花茎培養とかやってみたいヤツに朗報。キッチンでも培養できるってさ。
ttp://www.vitroplantslab.com/

3500円（ttp://www.vitroplantslab.com/p/item-detail/detail/i6.html）のキット貰ってやってみたけどめっちゃ簡単。花茎培養してみたけど全然コンタミない。
嘘だろって感じ。2茎で10節植えて３週間。4つほど芽が動き出した。今年胡蝶蘭、交配してみる。ちょっと遅いかもだけど。交配しようか節培養で増やすか迷う。
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↑という情報があったので試供品を取り寄せて試してみたんだが
よくある素人発明家の妄想商品ではなく、どうもマジもんっぽい。

マニュアル外の使用法になるが、外殖体用の殺菌剤を使って
コンタミしたフラスコから苗を新しい培地に移植してみた。
一週間たったが再コンタミは出ていない。
塩素液だとしつこく洗浄しても無菌化成功率は低いので、作業的に簡単すぎて驚いた。

ただし無菌化してるんじゃなく、抗菌効果で増殖を押さえているだけのようにも思われる。
植物によっては薬害が出るらしいし、長期的にはまたコンタミが出てくるかもしれないが、
第一印象では試用してみる価値があると思われる。

菌に効く薬は大抵はミトコンドリア&葉緑体にも効いちゃうから、
敏感なこには薬害出ちゃうかもしれないですね
MSが安いと何かしたくなっちゃいそうw

>>115
それ凄いな
慶弔培養に使えるんかな

>>114
正直言って有機酸で良いのかわかりません。植え替えで対処

本当は色の変わるpH指示薬を培地に入れてみて
植物が生育していく際の培地の様子を見ればいいんでしょうが

>>115
早速、試供品をお願いしてみた。
うまくいくようなら購入したいなぁ。

成長点が一つしかない植物に植物ホルモン塗って成長点増やせないかな

>>115
>>119
俺は培地や植物ホルモンやゲランガムは手元にあるので培地滅菌剤を購入した
今日届いたんだがそのうち暇ができたら試してみるわ

培地に糖を入れれば光合成する必要ないから、蛍光灯やLEDを照射する必要
ないと思いますが、植物を全然光を当てないで培養できないのですか。

>>122
暗黒条件下で生きることはできると思うけど、成長が遅くなったり色が薄くなったりするんじゃないかな。
培地にショ糖を入れるのは、培養容器内のCO2濃度と培養棚の照度が外の環境に比べて低いため、
植物があまり光合成をしないのでエネルギーを補ってあげてるだけ。
だから培養中、光がまったくいらないってわけではないと思う。

>>122
培養だけならできるよ。
でも、それは細胞を増殖させるだけの培養だから、
元の植物のような姿にはならないけど。

いわゆるもやしになるよ
白く徒長する

ちなみに白くなるのはクロロフィルを合成する酵素が光要求性なため

BAが1mg必要なんだけど3%のビーエー液剤だと33mgほどで0.033mL(33μL)で間違いないですよね？
これを計量するには何がいいでしょうか？
メスピペットで大丈夫かなぁ
●容量(mL)：
0.1
●1目盛(mL)：
0.001
ってのがあるんだけど

自己レスだけど>>115のヴィトロプランツでBAが1mg入ってるMS培地を売ってるな
メスピペットは必要なさそうだな
以前購入した他社のMS培地よりかなり安いしこっち注文することにするわ
ショ糖が少し足りないけど砂糖を足せば大丈夫かな
最近買った培地滅菌剤は不要だったかなぁ
まぁいいや

液体、固体にかかわらずそういう微量の薬剤を量り取る時には、まず希釈液を作ってる。
>>127の例だと、ビーエー液剤を0.5 mL取って50 mLの水で希釈して、希釈液を3.3 mL取る、みたいな。
0.1 mL測れるシリンジなら200円位で売ってるし（精度はそこまで良くないかもしれないが、どうせお遊びなので）

>>129
なるほどその手がありますね
でも面倒なのでBA入りの培地を注文しました

ところでIAAの代わりには等量のIBAで大丈夫かなぁ
IBAならオキシベロンが市販されてるけどIAAは検索すると中国のalibabaでしか見つからん
ご存知の方よろしく

同じppmにしてもIAAとIBAで植物に対する活性が違うかも。
自分だったらとりあえずモル濃度を揃えるけど。

ちなみにNAAなら普通に試薬がネットで買えたり。

>>131
ありがとうございます
私のやりたい植物だと、ある品種はIAAだと2mg/LでNAAなら0.2mg/Lが最適なんだけど品種によってはNAAは使いづらいみたいです
NAAは活着の最適幅がどうも狭いようです
とりあえず分子量から計算してIBAを1.7mgでやってみます

植物ホルモンのセット販売を見つけたけど全部は要らないんだよな
昨日まではたしか5種類の販売で8000円くらいだったと思うけど、今みたら6種類になって10000円ちょいになってる
1 AAって何だろう？って思ってたら今回はIAAに訂正されてた
http://www.tech-jam.com/items/KN3155640.phtml

カルスが全然再分化してくれない…
オーキシン増やそうがサイトカイニン増やそうがカルスがボコボコ増えるだけだから、
培養しすぎて再分化の能力が無くなっちゃったのかな？と疑ってる(←培養して１年近く経ってるし)

上手く再分化する培地にカルスを移植した時って、
カルスの増殖はピタッと止まって、再生した組織だけが生えてくるものなんでしょうか？
「もうちょっと待てばカルス以外にも何か生えてくるかも」と思うと
他のホルモン濃度を試す気がなかなか起きなくて…

ひとまず脱分化から出直してみるかなー

カルスからの細分化なら、ホルモンフリーの培地で起こることもあるよ
不定胚形成のことが多いけど
不定芽再生するカルスは、経験的に固くしまった、
つついてもぽろぽろと崩れないカルスかな
色も緑色

一応ホルモンフリーの培地も試してみましたが、カルスすら増えずに褐変。
(ホルモン添加する場合はMS培地で、ホルモンフリーのやつはハイポ培地ベースのだけど)
カルスはピンセットでつまんでも崩れないくらいには固かったですね。色はクリーム色〜緑色。

組織いっぱい採ってきて脱分化しなおしたので、
今度はあまり増殖させずに若いカルスのまま再分化させてみます。

>>134
そもそもの目的は何でしょうか？
無理にカルス化を狙わずに節や生長点からの多芽体を狙うのではダメですかね？

抗菌剤による培養の経過報告

細菌とカビは抑制できたのだが
植物プランクトン（藍藻？）がコンタミして爆殖ｗ

>>137
・ソマクローナル変異狙いなので、一度カルス化させたい
・対象の植物がロゼット状で茎頂採っちゃうと個体が死ぬので、
　根端を材料にしたい(葉から再生できるほど生長旺盛な品種ではないです)
といった理由から脱分化/再分化のプロセスを試しています。

対象の植物や近縁種では茎頂、脇芽などから多芽体を出している例もあるので、
どうしても再分化が出来ない場合の最後の手段として考えています。

>>139
なるほど変異狙いとなるとカルスぼこぼこ増やしてから再生させたいところですね
私は如何に変異を起こさずに個体の増殖をするか、という研究しかしてないのであまり参考になる事は言えないかも・・・
一応私のやった範囲内では、任意のオーキシン、サイトカイニンそれぞれ濃度1,5,10倍の9試験区を用いカルス誘導をし、
さらにそれを再生培地（誘導培地と濃度を変えたいくつかの試験区及びホルモンフリー）へ移し再生を試みました。
またこの過程で、エンブリオジェニックなカルスを得ることができたので、これを細かく砕き懸濁培養に移行し
カルスの継代や不定胚からの植物体再生などをしていました。

>>138
意外な落とし穴がｗ
私もサンプルを取り寄せたのですが、昨日先方よりメールがあり、
塩素の試薬サンプルに誤りがあったとかで再度送付してもらうことになりました。

>>138
植物プランクトンが無菌培養できるならそれはそれで便利かも

俺も>>115のやつの途中経過。

培地が余りそうだったから2つに分けた。
一つは無菌箱（日本エアーテックのMAC-15付き）を使って操作、もう一つは
普通の六畳間でやってみた。

8月11日から、温度25℃、長日条件で培養中だけど、今のところどちらも特にコンタミは
無い。しっかり抑制してるみたい。

色々と培地セット注文したから、もっと実験したいな。

NAAの代わりに農薬のヒオモン水溶剤100g(1-ナフタレン酢酸ナトリウム4.4%)を使ってる人いないですかね？
NAAの試薬は純正化学で25gが2200円だが小売りしてくれるか不明
和光純薬の25gは試薬リストから削除されてるが武井薬局で4200円で確実に購入できるが少し高い
そもそも25gなんて使い切れないな

ヒオモンなら簡単に買えて2800円なんだけど増量剤が心配だな
界面活性剤等95.6%と書いてあるけど
ちなみに1-ナフタレン酢酸ナトリウムの試薬5gなら上記の純正化学で1900円であるみたいだ
売ってくれるか知らんけど

オーキシンってサイトカイニンに比べると無茶苦茶安いよね。
構造的に合成しやすいのかね？

保守しとくわ

引き起こすのにいろんな文献インターネッツで読み漁ってるんだがカルス化を引き起こす為
に真っ暗な環境に置く必要があるって書いてあるのと24時間蛍光灯の下で管理したって
のと両方あるんだがどっちやねんｗ　みたいな　どっちもカルス化は成功してるみたい
なんだけどねー　１００％これが正解ってのはなくて試行錯誤するしかないのかなぁ

カルスは実物見たことないなぁ
光に当てたら緑カルス当てないと白カルスみたいな認識
置床後しばらく暗闇ってのは成長阻害物質出させないためじゃない？

光の当たるところに培地を置くと活性酸素が発生するって研究があったな

保守

育ててたササユリにカビみたいなのが生えて駄目になりました
無菌処理したつもりが失敗していたようです
誰かこのカビの種類わかる人居ませんか？

http://i.imgur.com/MrFsvRg.jpg

カビは培地によってコロニーの色や形態が全然違ってくるから、
真菌同定用の培地にでも植えなきゃわからないと思う

外では氷が張り始めた今日この頃。
室内気温も下がって来ましたが、培養瓶の温度管理って皆さんどうしていますか？

取り敢えずペルチェ冷温庫買ったのですが、照明が青ランプで心許ない。

どこかに組織培養の実践トレーニングみたいなのないの
>>115を見ると適切な試薬と手順を知っていれば家庭でも出来そうなんだけど

>>152
に、質問。今日こそは答えてもらおうじゃないか！キミはいつもそんなんだよね…ったく…じゃあ、あの件を聴くよ


神戸市の東、芦屋西宮の知的障害者施設で未成年利用者に性的な行為をして淫行条例で逮捕された三田谷学園元職員の堂垣直人(西宮市老松町)は、結局どういう罪になったの？
被害者家族のケアを芦屋市役所と兵庫県警はちゃんとやったのか？
差別や虐待は環境を選べない子供には関係ない。

http://www.youtube.com/watch?v=JxMzW3ZlV4g&sns=em


キミのことは一応評価はしてるんやで。朝はしっかり歯を磨くんだよ。

なんだコイツ(´Д` )

誤爆・・・？ｗ

スパムだとおも。

最近はプラスチックの容器に寒天培地を入れた水草の組織培養が売られているけど、あれはどうやって滅菌処理したんだろうか。
高温高圧をかけたら容器ごと溶けそうな気がするんだが、アルコール消毒程度で十分なのかな？

水草のはPPM使ってると思います。
あるいはガンマ滅菌か。

電子線滅菌

ポリプロピレン製：不透明
ポリカーボネート：透明
TPX：透明
これだけオートクレーブ出来そうなのがありますよ

電子レンジで滅菌したいんで耐熱プラスチックの培養ビン売ってるところ知らない？

>>158-160
ありがとうございます。

オートクレーブの加熱温度は120℃程度とわりかし耐えられそうではありますね。
ただその前に熱で歪む可能性を考えると加熱以外の滅菌装置が良いのかも・・・

やっぱり耐熱で価格が安いとガラス瓶くらいしかないや

培養っていうと温度／湿度／空調／光量とかみんな自動管理された研究室
みたいな環境をイメージするけど適度に遮光した半ビニールハウス的環境なら
屋外でも可能なの？真夏／真冬は無理でも春・秋の良い季節なら可能な気が
するんだけど・・・

>>164
回答じゃないけど俺もそれが気になってるわ
人工気象器だと小さいやつで29万くらいするしな
冬の間は室温〜加温のみの安いインキュベーターでいいのかな？
光量と照射時間をなんとかしないといけないけど

空気の動きが少なければ可能じゃないでしょうか
冬の加温なら、例えばパネルヒーターに瓶並べてホコリよけかぶせたり
色々出来そうに思います

問題は夏

加温しか必要のない秋〜春先まではいろいろ工夫できそうだが
夏はなー　冷房設備がないと平気で40度超えちゃいそうだな

ヤフオクで5万円のYAMATOのクリーンベンチが2か月くらい売れなくてずっと出品されてたが最近やっと落札されたみたいだな
でも10月には同じと思われる商品が10000円で出品されて11200円で落札されてるんだよなぁ
落札者がキャンセルしたんだろうか？

>>168
そんな高額商品なら、キャンセルされたかどうかは評価を見ればわかる。
取消ししないと500円も払うハメになるし。

>>169
評価がないからキャンセルかな？
落札額は11500円だったが次点が11000円の2名
繰り上げなかったんだな
質問者もいたけど入札してない

これって買う奴いるのかな？
http://page24.auctions.yahoo.co.jp/jp/auction/q44934696

この業者は、クリーンベンチを定価で導入してるとでも思っているのか。
どう見ても新品買うわ。

定価で導入することもあるだろうけど、
そういう時って、簿外でノートパソコンが何台も付いてくるよね。

>>171
それもずっと出品されてるな
買うやつなんかいないよなぁ

半額でも要らんなｗ

>>171-173
前よりは写真写りは良くなってるから買うやついるかもよ
今回の写真は以前の出品写真より綺麗に見えるわ

そんな話題の出た後に救世主のように卓上型が出品されました

>>176
俺も狙ってたんだけど離島への発送は駄目らしい
残念
昼間は入札者1名だったけど2名になってるな

離島はそういう面で不便みたいですね

この手の卓上型はすんごい重さがあるから設置までやってもらわないと
一人じゃ動かせないし家に置くにはちょっと大きすぎるかな

海運会社に課長の従弟がいるんだがなんとかならんかなぁ

そういえば所長は俺に交通事故負わせて3年間苦しませた奴だったわ

エヴァンゲリオンの、髪が青い娘って組織培養ですか？

ネルフという組織によって培養されたのは確実だが…

いえ、ホントはよく知らないです。
ごめんなさい。

神奈川にはオープンラボあるんだね、遠いわ…
こういう所、もっと増えて欲しい。

http://www.pref.kanagawa.jp/cnt/f450008/p581278.html
これ？
農業やってなくても使えるの？

こういう所で茎頂培養してみたいなー